circRNA研究思路知多少
欄目:最新研究動態 發布時間:2020-03-27
環狀RNA(circRNA)是一類非編碼RNA,可以參與各類生理和病理過程,包括腫瘤發生和癌癥進展等,備受科學界的關注......

   環狀RNA(circRNA)是一類非編碼RNA,可以參與各類生理和病理過程,包括腫瘤發生和癌癥進展等,備受科學界的關注。對于circRNA的研究正在火熱進行中,那么關于它的研究思路知多少呢?一篇發表在Molecular Cancer上面的文章帶我們了解熟悉這個明星分子。

研究思路:

結果:
1. 非小細胞肺癌(NSCLC)細胞中成纖維細胞生長因子受體1(FGFR1)衍生的circRNA的鑒定

   circFGFR1(hsa_circ_0084003)在NSCLC腫瘤組織的表達上調,circFGFR1高的NSCLC患者有較大的腫瘤、淋巴結轉移和細胞分化不良,circFGFR1高表達的患者預后明顯比低表達的差,circFGFR1表達是術后復發和總生存期的獨立預測因子。這些表明circFGFR1可能參與了非小細胞肺癌的進展。


2. 體內外CircFGFR1促進NSCLC細胞增殖,遷移和侵襲
   NCI-H358和NCI-H1299細胞過表達circFGFR1,促進了增殖,遷移和侵襲。癌細胞皮下植入裸鼠,發現circFGFR1過表達顯著促進腫瘤生長和肺轉移。


3.CircFGFR1充當多種miRNA的海綿
   使用RIP circFGFR1下拉實驗,純化circFGFR1相關的RNA,發現circFGFR1和miR-381-3p的富集,表明miR-381-3p是NSCLC細胞中與circFGFR1相關聯的關鍵miRNA之一;RNA免疫沉淀結果顯示circFGFR1和miR-381-3p顯著富集;螢光素酶實驗顯示miR-381-3p降低了野生型circFGFR1細胞熒光素酶活性;使用生物素化的miR-381-3p模擬物下拉分析發現circFGFR1顯著富集;FISH分析表明circFGFR1和miR-381-3p共定位在NSCLC細胞中;circFGFR1過表達或沉默不影響miR-381-3p表達,miR-381-3p上調或敲低后circFGFR1沒有顯著變化。這些表明circFGFR1和miR-381-3p可能不會降解彼此。以上所有實驗表明NSCLC細胞中circFGFR1可能充當miR-381-3p的海綿。


4. CircFGFR1海綿miR-381-3p上調CXCR4表達
   StarBase v3.0,PITA和miRanda算法被用來預測miR-381-3p靶基因,幾種致癌基因UBE2C,FGF7,FGFR2,FGFR1,IGF2BP1,MET和CXCR4 3'UTR mRNA包含miR-381-3p的靶序列。pLG3熒光素酶報告基因顯示轉染了野生型(wt)3'UTR序列的細胞的熒光活性能被miR-381-3p模擬物抑制;CXCR4 mRNA和蛋白的水平在miR-381-3p過表達細胞中降低,CXCR4 mRNA和蛋白的水平在circFGFR1過表達后明顯增加;在NSCLC患者組織樣本中發現circFGFR1和CXCR4正相關。


5.敲除CXCR4可逆轉circFGFR1誘導的非小細胞肺癌細胞的增殖,遷移和侵襲
   CXCR4-基因敲除NCI-H358和NCI-H1299細胞過表達circFGFR1 惡性表型與對照細胞無明顯差異。


6.較高水平的circFGFR1表達與細胞毒性T淋巴細胞排斥和抗PD-1 NSCLC治療相關
   調查circFGFR1 / CXCR4軸和免疫逃逸之間的關系,NSCLC組織中CD8 + T數明顯低于鄰近的非腫瘤組織,NSCLC組織circFGFR1 /CXCR4表達和CD8 + T細胞之間存在負相關,miR-381-3p表達與CD8 + T顯示出正相關,這些提示circFGFR1可能通過海綿miR-381-3p上調CXCR4發揮其免疫抑制作用。進評估circFGFR1表達對抗PD-1治療抵抗力的作用,分析PD-1抗體在接受LLC-circFGFR1細胞異種移植小鼠中的抗腫瘤作用,發現LLC-circFGFR1組腫瘤生長表現出明顯的對PD-1抗藥性表型,生存時間較短。

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